Příprava vzorku:
Sběr vzorků: Shromažďujte vzorky, jako je krev, tkáň, sliny a moč podle účelu experimentu.
Extrakce DNA: K extrahování DNA ze vzorku použijte vyhrazenou extrakční soupravu DNA.
Příprava reakce PCR:
Design Primery: Páry specifických pro návrh primerů založené na cílové sekvenci pro amplifikaci šablony DNA.
Připravte reakční směs: včetně šablony DNA, primerů, pufru, DNA polymerázy, DNTP (deoxynukleosid trihosfáty), Mg 2+ atd.
Nastavit program PCR:
Nastavení přístroje PCR: Vstupte do přednastavených parametrů cyklu PCR, jako je například přehřívací teplota 95 stupňů, teplota denaturace (jako je 95 stupňů), teplota žíhání (jako je 55 stupňů), teplota prodloužení (jako je 72 stupňů) a počet cyklů.
Reakce PCR:
Přidat vzorek: Přidejte reakční směs do reakční nádrže nebo čipu PCR a každý vzorek má obvykle jednu reakci dobře.
Proveďte PCR: PCR přístrojové cykly podle přednastaveného programu, včetně kroků vytápění, chlazení, žíhání a prodloužení.
Analýza produktu:
Chlazení po amplifikaci: Po dokončení PCR se vzorek krátce ochladí při 4 stupních.
Elektroforetická separace: Použijte technologii gelové elektroforézy, jako je elektroforéza agarózového gelu, k oddělení produktů PCR různých délek.
Fluorescenční skenování: Fluorescenčně značené primery vyzařují světlo specifické vlnové délky v amplifikovaném produktu a přístroj PCR čte tyto signály a zaznamenává je.
Zpracování a interpretace dat:
Software pro analýzu dat: Pomocí specializovaného softwaru analyzujte fluorescenční signál a vypočítejte koncentraci nebo relativní koncentraci cílového fragmentu.
Interpretace výsledků: Na základě křivky PCR a základní linie určete, zda je PCR úspěšný, zda existuje cílový fragment a kolik je.
Záznam a ochrana výsledků:
Zaznamenejte výsledky do experimentální zprávy a správně zachovejte původní data a vzorky.